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抗体药物开发「加速器」
[ 发布日期:2025-3-26 10:56:39    阅读次数:248 ]
       典型的细胞系开发工作流程始于经质粒转染后表达免疫球蛋白(IgG)的宿主CHO细胞,将已转染的单个CHO细胞分离出来进行克隆扩增并筛选出高滴度单克隆以评估其稳定性和亲和力,最终扩增这些高抗体产量的CHO细胞系以进行大规模抗体生产。

      细胞系开发过程中,快速分离单个CHO细胞是加速整个流程的关键步骤。然而,传统的单细胞分离方法如流式细胞分选(FACS)和有限稀释存在一些局限性。FACS虽然能够有效地分离单细胞,但其操作需要专门的培训和较长的设备设置时间。此外,为了避免样本间的交叉污染,FACS仪器在使用过程中需要频繁更换流体线路。更为关键的是,FACS在分选过程中会施加高达70 PSI的压力,这可能会对细胞造成应激,降低其活力,尤其是对于那些难以表达的蛋白质。



相比之下,有限稀释方法虽然对细胞的损伤较小,但其过程劳动密集、耗时且效率较低,难以高效地产生单细胞克隆。这些传统方法的不足之处凸显了对更自动化、高通量单细胞分离技术的迫切需求,以提高细胞系开发的效率和成功率。
 
 






Bio-Techne分选系统提供新方案

Bio-Techne单细胞柔性分选系统为细胞系开发提供了自动化、高通量的创新解决方案。与传统方法一样,CHO细胞首先会被转染含有目标蛋白编码的质粒,以实现大规模生产。转染后,细胞悬液会被导入到专有的微流控单细胞芯片中,并通过Pala分选仪精确地分选到96孔或384孔板中。培养成单细胞克隆,并通过ELISA分析来测定克隆的抗体滴度。



与有限稀释(约30%)相比,Bio-Techne单细胞柔性分选系统平均铺板效率超95%,单细胞效率80-90%。



与FACS相比,占地面积更小,易于无菌操作,开机校准时间短、关机流程简单迅速、鞘液消耗更少、耗材成本低、易于终端用户操作、仪器维护成本更低。




Chakrabarti, Lina et al. “Simplifying stable CHO cell line generation with high probability of monoclonality by using microfluidic dispensing as an alternative to fluorescence activated cell sorting.” Biotechnology progress vol. 40,3 (2024): e3441. doi:10.1002/btpr.3441

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