在生物药研发中，抗体的电荷异构体直接影响药物疗效与安全性。离子交换色谱（IEX）操作繁琐且分辨率有限，传统的毛细管电泳-质谱联用（CE-MS）常因高浓度缓冲液与ESI不兼容，导致数据偏差。近期《Electrophoresis》期刊发布的一项研究，该研究利用MauriceFlex进行电荷异构体的快速分离，并进行质谱分析，为这一难题提供了高效的解决方案。

研究以单克隆抗体Matuzumab为测试对象，通过MauriceFlex仪器实现了电荷异构体的快速分离和离线质谱分析。结果显示，MauriceFlex不仅能够高效地分离电荷异构体，还能与质谱无缝对接，提供高分辨率的分析结果。这种方法不仅克服了传统方法的局限性，还显著提高了分析的准确性和可靠性，为单克隆抗体的深层表征提供了全新的视角。

使用MauriceFlex仪器仅用1天完成了从分析型cIEF转化为制备型馏分收集的方法开发，并在2.5小时内完成了高纯度电荷异构体馏分收集。结果发现分析型与制备型cIEF的峰数量相同，方法转化后分离效果良好，表明从分析到制备的方法转换可靠，为后续质谱分析提供了可靠的样本。

图1 Matuzumab的分析型icIEF(上)与制备型icIEF馏分收集电泳图(下)对比。

为了评估馏分收集方法的稳定性，将Matuzumab样品在制备型icIEF模式下独立收集三次（Run1- Run 3），通过分析型icIEF对每次收集的馏分进行验证（图2），结果显示各电荷异构体在不同分离批次中的峰形和位置高度一致，表明MauriceFlex制备型icIEF（馏分收集）具有良好的重现性和准确性。尽管三次实验馏分在96孔板中分布位置存在微小偏移（1-2孔），但通过分析型icIEF验证可轻松匹配对应馏分，验证了馏分收集过程的稳定性。

图2 Matuzumab样品三次馏分收集后的分析型icIEF结果

使用高分辨率质谱仪检测未分离的Matuzumab抗体和经过MauriceFlex分离的馏分，发现未分离的样品质谱信号重叠严重，而经MauriceFlex分离的馏分在质谱图上显示出更清晰和特异的峰，表明MauriceFlex有效地富集了特定的电荷异构体。

通过质谱成功鉴定了包括C末端赖氨酸异构体（K2、K1、K0）糖基化异构体（FA2和A2G1），这些发现对于理解单克隆抗体的结构和功能具有重要意义。研究还发现了一些未报道过的酸性异构体，表明MauriceFlex馏分收集和质谱的分析方法能有效揭示复杂电荷异构体的结构信息。

图3 非分馏样品（上）与icIEF馏分（下）的质谱对比

作者以Matuzumab为测试对象，成功开发了分析型icIEF方法，并快速转化为制备型icIEF方法，2.5小时内完成高纯度电荷异构体馏分收集，质谱分析则清晰揭示了包括C末端赖氨酸异构体、糖基化异构体在内的多种电荷异构体，甚至发现了一些未报道过的酸性物质。MauriceFlex+MS联用方法不仅克服了传统方法的局限性，还显著提高了分析的分辨率和准确性，为单克隆抗体的深层表征提供了全新的视角，是生物药研发企业加速研发进程、提升产品质量的不二之选。

❶一机智能：CE-SDS、Turbo CE-SDS、icIEF和icIEF组分收集多种模式卡盒即插即用，简单易用

❷快速开发：1-2天即可实现快速方法开发,平台方法易转移

❸高效分离：数小时内即可分离和收集电荷异构体组分

❹应用自由：馏分收集后的样本可兼容多种下游表征：质谱分析、肽图分析、糖型分析、活性分析等等

❺适用广泛：全自动表征生物大分子蛋白质药物电荷异构体和分子量大小：单抗、双抗、抗体偶联药物、重组蛋白、融合蛋白、病毒载体等多种类型样品