目前,动物疫病检测主要使用针对单一抗原的免疫学检测或单一靶标核酸序列的PCR技术。PCR技术在灵敏度上显著优于传统抗原检测。但即使这样,针对单一病原体核酸靶标的PCR检测难以满足大规模样本筛查对时效性和成本控制的要求,从成本效益的角度考量,并不适合作为常规筛查技术来预防动物性病原感染的爆发。
将核酸检测的技术路径从单一检测升级至多重联检方案,并提升单次运行中检测的样本通量,是构建高效动物疫病监测防控体系的关键突破方向。
罗氏公司新一代荧光定量PCR系统LightCycler PRO,在继承LightCycler 480核心优势——即多棱镜光路设计确保所有孔间检测一致的基础上,实现三重升级:
1 – 升级至7通道检测,无需色差补偿,轻松实现单管反应同步检测7种病原体
2 – 专利的VCM蒸汽均温模块,确保整板反应温控准确且一致(温度准确性误差≤±0.1℃,孔间温度均一性可达0.1℃),在复杂的多重反应体系中提升检测灵敏度
3 – 40CM触屏操作,提供中英文操作界面,直观友好,并能通过平板电脑等移动端进行远程访问
此外,LightCycler PRO的模块化设计支持96/384孔板直接互换,例如在样本筛查场景下,使用384孔反应模块(典型温度程序反应时间≤40分钟),结合单管7种病原的检测设计,能在短时间内完成低成本的高通量筛查:在一次PCR实验运行中,可对300多份样本实施7重病原体的同时检测,相较于单靶标检测,整体检测时间缩短至原来需时的1/7,检测成本降低至单靶标的1/4-1/3。通过验证,我们发现在检测性能上,基于LightCycler PRO的单管7重在检测LOD和定量线性方面,均能达到单靶标检测的同一水平。
下图为LightCycler PRO荧光定量PCR系统上进行单管7重检测的典型结果图,在不同浓度的(病毒)核酸载量下均可清晰区分7种不同病原体的信号曲线,在多重检测中获得准确可靠的检测结果:

7重动物疫病相关病原核酸检测(滴度109-108)

7重动物疫病相关病原核酸检测(滴度102-101)

动态检测范围11个数量级(1010-100)

LightCycler PRO实时荧光定量PCR仪
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