简介

        AlphaScreen 是一种基于微珠的筛选技术，旨在快速、可靠且经济高效地检测生物分子相互作用。Alpha (ampli‑edluminescent proximity homogeneous assay “放大化学发光亲和均相检测”的首字母缩写）技术使用了由不同的化学混合物组成的供体微珠和受体微珠，它们可以连接到各种类型的生物相关分子。在680 nm激光的照射下，供体微珠中的光敏剂苯二甲蓝(Phthalocyanine) 将周围环境中的氧分子转化为转化成一种高能活跃的氧状态- 单线态氧( S i n g l e tOxygen)。单线态氧小分子的半衰期为4 s，在此期间它们可以在溶液中扩散高达长达 200 nm的距离。如果在该范围内存在受体微珠，单线态氧就会触发受体微珠的二甲基噻吩衍生物，继而通过激发一系列的化学反应，最终在520-620 nm产生光信号，从而达到检测目的。

        AlphaScreen Omnibeads 微珠是一种易于使用、经济高效的工具，产生 AlphaScreen 信号所需的全部化学物质都在这些微珠中，专为 AlphaScreen 兼容检测仪器的定期质控、酶标仪标准化和校准而设计。

        Tecan Spark酶标仪配备了增强型检测模块，包括用于优化 AlphaScreen 供体微珠激发的高功率激光光源，以及优化滤光片组合，非常适用于AlphaScreen，AlphaLISA®，AlphaPlex™ 和潜在的新 Alpha 技术应用的发射信号超高灵敏检测。此外，Spark 酶标仪还拥有 Tecan 久负盛誉的实时温度校正功能，可改进微孔板上样品温度波动带来的影响。Spark 酶标仪还为 Alpha 技术集成了易于使用、直观的软件解决方案和预先优化的实验流程，为AlphaScreen,AlphaLISA 和 AlphaPlex 检测保驾护航。

        本技术说明主要讨论了AlphaScreen 技术在 Spark 多功能酶标仪上的成功应用，并介绍了仪器的检测灵敏度、均一性和读取时间等方面的性能。

材料和方法

• Spark 多功能酶标仪(Tecan, 奥地利)

• AlphaScreen Omnibeads (PerkinElmer, 美国)

• 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)

• 384孔，白色低容量微孔板（Greiner Bio-One，德国）

        利用 Omnibeads 作为代表性化学物质产生的最小可检测信号，对 AlphaScreen 的灵敏度进行评估。根据制造商的说明 (1) 使用 Omnibeads，在避光条件下（<50 lux）移液以防止组件发生光漂白。简而言之，在 2.44 至 20,000 ng/ml 的浓度范围内制备了 Omnibeads 稀释系列 (1:2)。

        将各浓度稀释液的5份重复样品分别添加到 384 孔低容量微孔板（20 l/孔）中；同时，将不含 Omnibeads 的 PBS缓冲液作为空白对照。此外，将 10,000 ng/ml Omnibeads 稀释液的复制品添加到另外单独的微孔板上， 以评估AlphaScreen 检测的均一性。AlphaScreen 检测的仪器参数设置参见表1。

        将平均空白校正值与 Omnibeads 的最终浓度作图，并添加一条线性趋势线，并将截距设置为零。检测限由趋势线方程 y = kx 确定，使用空白的标准偏差作为 y 值。

        为了确定检测的均一性，CV 使用公式 1 计算：

结果

        灵敏度和线性度

        Spark 酶标仪能够检测低至 1.6 ng/ml 的 Omnibeads 浓度，线性度为 0.9999（R2 值），信号/空白比为 1,154:1（图2）。

        均一性

        将 10,000 ng/ml Omnibeads 稀释液的 50 多份重复的样品移液至 384 孔板中。检测结果表明信号均一性非常好，CV 值仅为 2.2% 。这表明 Spark 酶标仪能够检测 AlphaScreen信号，且不会产生显著的结果波动（图 3）。

读取时间

        AlphaScreen 在不同微孔板格式中的总读取时间包括激发和积分时间，以及应用温度校正功能所需的时间。通常，我们推荐使用 Alpha检测的标准设置，即激发和积分时间分别为 100 和 300 毫秒，可以在 4 分 28 秒内完成整块 384孔板的读取。当温度校正功能激活后，基于 IR 的温度评估与信号检测会同时进行，因此检测时间会稍微延长。这导致绝大多数特定微孔板格式的读取时间延长约20%。然而，我们可以通过使用更短的激发和发射周期（激发和积分时间都低至 10 毫秒）来显著缩短总读取时间，同时为个性化应用提供优化方案。

        表 2 显示了 96 孔板和 384 孔板的 AlphaScreen 读取时间概览。

结论

        Spark 酶标仪的增强型检测模块在 96 孔和 384 孔板格式的灵敏度和均一性等基本质量参数方面，均为 AlphaScreen检测提供了出色的性能保证。温度校正功能可用于进一步提高分析性能，而无需在检测前对样品进行耗时的温度平衡过程。与 Spark 酶标仪经典的检测模式结合，Alpha 技术模块为科学研究、分析方法的开发以及高通量筛选等提供了卓越的性能。

参考文献

1) Using the AlphaScreen Omnibeads.www.perkinelmer.com/CMSResources/Images/44-73451MAN_AlphaScreenOmniBeads.pdf


(文章来源：hmez.huimeihealth.com.cn/hm/scrm/scrmmobile/eda/1654372357725540352)